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SFM無血清培養(yǎng)基的使用注意事項

更新時間:2020-05-21 點擊次數:1334
   SFM無血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎上發(fā)展起來的,與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比,既能滿足細胞在體外長時間培養(yǎng)的要求,又能避免動物血清所帶來的不利因素。SFM無血清培養(yǎng)基被廣泛的應用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。
  大多數的無血清培養(yǎng)基含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能,如提供細胞貼壁所需的基質,抗生物反應器剪切力,作為脂質和其他生長分化因子的載體等。
  那么接下來就讓我們再來了解一下SFM無血清培養(yǎng)基的使用注意事項有哪些吧。
  建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,直到每一次細胞適應了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。
  在適應過程中,不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養(yǎng)基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質,因而更易于受外界因素的影響。
  細胞培養(yǎng)適應替代血清:許多細胞利用連續(xù)適應方法能很好的適應,用包含FBS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1(v∶v)的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式,連續(xù)幾代減少當前培養(yǎng)基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應改變血清比例時,傳代細胞2到3次。
  培養(yǎng)可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清,生長的延遲可能會發(fā)生,4允許進行2到3次的傳代,使生長率恢復到以前的水平。
  特別需要強調的是:配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質量的水,如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子,既便水中的有毒物質含量甚微,也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素之一。

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